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冻存管的冷冻步骤详解

点击次数:375  发布时间:2021-01-20
   实验耗材目前主要产品有离心管、冻存管、吸头(吸嘴)、枪头、载玻片、盖玻片、载玻片盒、冷冻管、染色架、培养板、培养皿、一次性手套(PE、乳胶),硅胶塞、蓝盖试剂瓶、试管、酸缸、碱缸、冻存架、液氮罐提架、放水桶等几十种产品;但主要的的耗材是冻存管和离心管。先来看看冻存管的解冻步骤吧:

   1、用预热的PBS溶液洗涤细胞,吸取溶液,含有胰蛋白酶和EDTA的溶液覆盖细胞(薄薄的液层足够,胰蛋白酶和EDTA的浓度需要根据细胞系确定)。

   2、37℃孵育细胞3-5分钟。

   3、细胞从底部脱离之后,终止孵育,加入含有血清的培养基,用移液器轻轻地悬浮细胞。

   4、离心细胞悬液(500 x g, 5分钟),用含有血清的培养基重新悬浮。

   5、细胞计数。

   6、离心细胞悬液(500 x g, 5分钟),去除上清液,用适量体积的含有血清的培养基重新悬浮细胞。

   7、以1:1体积比混合细胞和冻存液(60%培养基,20%胎牛血清,20% DMSO),然后转移到Cryo.sTM冻存管中。冻存的细胞密度为 1-5×106 个/毫升。

   8、含有细胞的Cryo.sTM冻存管建议以−1 K / min 的速率降温,可以将冻存管置于−70℃含有异丙醇的容器中。如果Cryo.sTM冻存管存储其他样品,可以直接放置在−20℃,−70℃或者液氮的气相。为了确保样品冷冻均匀,4 mL和5 mL的Cryo.sTM冻存管需要先置于在−20℃冰箱过夜,然后再转移到−70℃或者液氮的气相。

   9、然后转移Cryo.sTM冻存管到液氮罐。为了避免污染(如支原体)和安全考虑,请将Cryo.sTM冻存管置于液氮的气相,切勿置于液相。

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